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[所属栏目: 等电聚焦电泳仪]

BIO-RAD等电聚焦电泳仪操作规程
2011-10-14 15:50 邹金华 

BIO-RAD等电聚焦电泳仪操作规程

1 提前10min拿出胶条放在干燥滤纸上溶胀。

2 在一向槽中加入样品,用枪涂布均匀。样品量如下:

胶长 7cm胶 11cm胶 17cm胶

样品量 125 ul 185 ul 300 ul

蛋白载量 169 ul 250 ul 405 ul

3 双手持镊子将胶条保护膜撕去(从负极向正极),将有载体离子的一面朝下覆盖于槽内样品上(操作时要从一端轻轻放下,注意正负极、避免气泡)。

4 加矿物油500—700 ul左右,没住胶条,以液面高度为槽一半为准。

5 盖好一向槽的盖子, 打开电泳仪盖子,将一向槽装入电泳槽内,注意正负极(红色正极、黑色负极)。

6 接上电源,打开右侧的开关。

7 设置程序。

程序的设置主要根据胶条数和胶条长度,参照如下:

7cm胶条

水化 50V 12-16小时(20℃) 主动水化

S1 250V 线性 20分钟 除盐

S2 4000V 线性 2小时 升压

S3 4000V 快速 10,000伏小时 聚焦

S4 500V 快速 任意时间 保持

􀁺 选择所放置的胶条数。

􀁺 设置每根胶条的极限电流。(30-50μA/根)

􀁺 设置等电聚焦时的温度。(20℃

11cm胶条

水化 50V 12-16小时(17℃) 主动水化

S1 250V 线性 20分钟 除盐

S2 8000V 线性 2.5小时 升压

S3 8000V 快速 20,000伏小时 聚焦

S4 500V 快速 任意时间 保持

􀁺 选择所放置的胶条数。

􀁺 设置每根胶条的极限电流。(50μA/根)

􀁺 设置等电聚焦时的温度。(20℃)

17cm胶条

水化 50V 12-16小时(20℃) 主动水化

S1 250V 线性 20分钟 除盐

S2 10000V 线性 2.5小时 升压

S3 10000V 快速 40,000伏小时 聚焦

S4 500V 快速 任意时间 保持

􀁺 选择所放置的胶条数。

􀁺 设置每根胶条的极限电流。(50-70μA/根)

􀁺 设置等电聚焦时的温度。(20℃)

8 待程序设置完后,给程序命名,保存,按“小人”图标键开始电泳。

9 电泳结束,按“红色手型”键停止电泳。拔掉电源,取出一向槽,进行下一步实验。

注意:(1)必须加矿物油,以防仪器烧坏。

(2)500 V 保持电压要设。

(3)实验完毕,清洗一向槽,晾干,收好。

图 片:

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