高效液相色谱仪操作规程

一、开机：

1、打开计算机，进入中文Windows XP画面，并运行CAG Bootp Server程序。

2、打开1200 LC 各模块电源。

3、待各模块自检完成后，双击“Instrument 1 Online”图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入工作站。

5、把流动相放入溶剂瓶中，打开冲洗阀。

7、点击“泵”图标，点击“设置泵”选项，设流速：5ml/min。

9、点击“泵”图标，点击“控制”选项，选中“启动”，点击“确定”系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。再点击“控制”选项，选中“关闭”，点击“确定”关泵，关闭冲洗阀。

11、点击“泵”图标，点击“设置泵选项”，设流速：1.0ml/min。

12、点击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。 也可输入停泵的体积，点击“确定”。

二、建立数据采集方法：

1、从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，点击“确定”。

2、方法信息：在“方法注释”中加入方法的信息，点击“确定”。

3、泵参数设定：在“流速”处输入流量,如1.0ml/min，在“溶剂 B”处输入80.0,也可“插入”一行“时间表”，编辑梯度。在“压力限”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子，点击“确定”。

4、自动进样器参数设定:选择合适的进样方式，如进样体积5.0μl ,洗瓶位置为7号。

5、柱温箱参数设定:在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如：40℃。并选中它,点击“更多” 键,选中“与左侧相同”，使柱温箱的温度左右一致。

6、VWD检测器参数设定:在“波长” 下方的空白处输入所需的检测波长,如280nm,点击“峰宽”,选择合适的响应时间, 如>0.1min。在“时间表” 中可以“插入”一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm，点击“确定”。

7、在“运行时选项表”选中“数据采集”，点击“确定”。

8、点击“方法”选中“方法另存为”，输入一方法名，如“测试”，点击“确定”。

9、从菜单“视图”选中“在线信号”,选中“信号窗口1,点击“改变” ,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击“确定”。

10、从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，输入操作者姓名；在“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”。

11、从“仪器” 菜单选择“系统开启”。

12、等仪器准备好，基线平稳，从“运行控制”菜单中选择“运行方法”，进样。(若无自动进样器，则基线平稳后，进样并搬动手动进样阀，启动运行。)

三、建立数据分析方法编辑:

1、从“视图”菜单中，点“数据分析”进入数据分析画面。从“文件”菜单选择“调用信号”，选中数据文件名，点击“ 确定”，调出数据。

2、谱图优化：从“图形”菜单中选择“信号选项”。从“范围” 中选择“满量程”或“自动量程”及合适的时间范围或选择“自定义量程” 调整。重复此操作，直到图的比例合适为止。

3、积分: 从“积分”菜单中选择“积分事件”选项。选择合适的“斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。再从“积分”菜单中选择“积分”选项，则数据被积分。如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。点击左边“√”图标，将积分参数存入方法。

4、打印报告。

四、关机:

1、最先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统。

2、退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。

3、关闭Agilent 1200各模块电源开关。

Agilent 1200 LC维护保养注意事项：

1、色谱柱长时间不用，存放时柱内应充满溶剂，两端封死（如乙腈/甲醇适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。

2、手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口。

3、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。

4、带seal-wash的1200 LC，要配制90%水+10%异丙醇，开启seal-wash清洗泵。

5、溶剂不能干涸。