BIO-RAD等电聚焦电泳仪操作规程

1 提前10min拿出胶条放在干燥滤纸上溶胀。

2 在一向槽中加入样品，用枪涂布均匀。样品量如下：

胶长 7cm胶 11cm胶 17cm胶

样品量 125 ul 185 ul 300 ul

蛋白载量 169 ul 250 ul 405 ul

3 双手持镊子将胶条保护膜撕去（从负极向正极），将有载体离子的一面朝下覆盖于槽内样品上（操作时要从一端轻轻放下，注意正负极、避免气泡）。

4 加矿物油500—700 ul左右，没住胶条，以液面高度为槽一半为准。

5 盖好一向槽的盖子， 打开电泳仪盖子，将一向槽装入电泳槽内，注意正负极（红色正极、黑色负极）。

6 接上电源，打开右侧的开关。

7 设置程序。

程序的设置主要根据胶条数和胶条长度，参照如下：

7cm胶条

水化 50V 12-16小时（20℃） 主动水化

S1 250V 线性 20分钟 除盐

S2 4000V 线性 2小时 升压

S3 4000V 快速 10,000伏小时 聚焦

S4 500V 快速 任意时间 保持

�� 选择所放置的胶条数。

�� 设置每根胶条的极限电流。（30-50μA/根）

�� 设置等电聚焦时的温度。（20℃

11cm胶条

水化 50V 12-16小时（17℃） 主动水化

S1 250V 线性 20分钟 除盐

S2 8000V 线性 2.5小时 升压

S3 8000V 快速 20,000伏小时 聚焦

S4 500V 快速 任意时间 保持

�� 选择所放置的胶条数。

�� 设置每根胶条的极限电流。（50μA/根）

�� 设置等电聚焦时的温度。（20℃）

17cm胶条

水化 50V 12-16小时（20℃） 主动水化

S1 250V 线性 20分钟 除盐

S2 10000V 线性 2.5小时 升压

S3 10000V 快速 40,000伏小时 聚焦

S4 500V 快速 任意时间 保持

�� 选择所放置的胶条数。

�� 设置每根胶条的极限电流。（50-70μA/根）

�� 设置等电聚焦时的温度。（20℃）

8 待程序设置完后，给程序命名，保存，按“小人”图标键开始电泳。

9 电泳结束，按“红色手型”键停止电泳。拔掉电源，取出一向槽，进行下一步实验。

注意：（1）必须加矿物油，以防仪器烧坏。

（2）500 V 保持电压要设。

（3）实验完毕，清洗一向槽，晾干，收好。